SYBR ग्रीन और ताकमान के बीच अंतर

SYBR ग्रीन और ताकमान वास्तविक समय पीसीआर की प्रवर्धन प्रक्रिया का पता लगाने या देखने के लिए दो तरीके हैं। एसवाईबीआर ग्रीन एक विधि है, जो न्यूक्लिक एसिड धुंधला डाई के बीच के अंतराल पर आधारित है, जबकि टाकमैन एक विधि है जो हाइड्रोलिसिस जांच पर आधारित है। दोनों प्रौद्योगिकियों को पीसीआर के दौरान प्रतिदीप्ति उत्पन्न करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, जो वास्तविक समय पीसीआर मशीन को "वास्तविक समय" में प्रतिक्रिया की निगरानी करने की अनुमति देता है। SYBR ग्रीन विधि को एक फ्लोरोसेंट डाई का उपयोग करके किया जाता है जिसे SYBR ग्रीन कहा जाता है और डाई को बांधकर डबल फंसे हुए डीएनए का प्रवर्धन करता है। ताकमान को दोहरे-लेबल वाले जांच का उपयोग करके बाहर किया जाता है और ताक पोलीमरेज़ द्वारा जांच में गिरावट और फ्लोरोफोर के विमोचन द्वारा प्रवर्धन का पता लगाता है। यह SYBR ग्रीन और ताकमान के बीच महत्वपूर्ण अंतर है।

सामग्री 1. अवलोकन और मुख्य अंतर 2. SYBR ग्रीन क्या है। Taqman 4. साइड तुलना द्वारा साइड - SYBR ग्रीन बनाम Taqman 5. सारांश

एसवाईबीआर ग्रीन एक फ्लोरोसेंट डाई है जिसका उपयोग न्यूक्लिक एसिड को दागने के लिए किया जाता है, विशेष रूप से आणविक जीवविज्ञान में दोहरे फंसे हुए डीएनए। SYBR ग्रीन विधि का उपयोग वास्तविक समय पीसीआर के दौरान पीसीआर उत्पादों की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। एक बार जब यह डीएनए के साथ बंध जाता है, तो परिणामी डीएनए-डाई कॉम्प्लेक्स नीली रोशनी को अवशोषित करता है और तीव्र हरी रोशनी का उत्सर्जन करता है। यह संरचनात्मक परिवर्तन के कारण होता है जो डाई अणु में डबल-फंसे डीएनए के साथ बंधन पर होता है। जब पीसीआर अधिक से अधिक डीएनए बनाता है, तो अधिक डाई अणु डीएनए के साथ बंधते हैं, जिससे अधिक प्रतिदीप्ति उत्पन्न होती है। इसलिए, पीसीआर उत्पाद संचय के साथ प्रतिदीप्ति बढ़ जाती है। इसलिए, SYR ग्रीन प्रतिदीप्ति का पता लगाने के द्वारा पीसीआर उत्पाद की मात्रा को मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है।

SYBR ग्रीन डाई का उपयोग साइटोमेट्री और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी में डीएनए लेबलिंग के लिए भी किया जा सकता है। एथिडियम ब्रोमाइड को सफलतापूर्वक SYBR ग्रीन द्वारा प्रतिस्थापित किया गया है क्योंकि एथिडियम ब्रोमाइड जेल वैद्युतकणसंचलन में डीएनए दृश्य के दौरान निपटान की समस्याओं के साथ एक कार्सिनोजेनिक डाई है।

SYBR हरी विधि के फायदे और नुकसान हैं। यह विधि बहुत संवेदनशील, सस्ती और उपयोग में आसान है। हालांकि, किसी भी दोहरे-फंसे डीएनए से बांधने की अपनी क्षमता के कारण, निरर्थक बंधन से पीसीआर उत्पाद की मात्रा का ठहराव हो सकता है।

वास्तविक समय की पीसीआर प्रक्रिया की निगरानी के लिए टेकमैन SYBR ग्रीन का एक वैकल्पिक तरीका है। यह विधि नए स्ट्रैंड और फ्लोरोफोरे के विस्तार के दौरान प्रोब को नीचा दिखाने के लिए टाक पोलीमरेज़ एंजाइम की 5 '- 3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि पर निर्भर करती है। इस पद्धति में दोहरे लेबल वाली जांच का उपयोग किया जाता है और यह जांच के हाइड्रोलिसिस पर आधारित है। प्रोब को फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किए गए डीएनए ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स होते हैं जिसमें 5 'छोर पर एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर अणु (फ्लोरोफोर) और 3' के अंत में एक क्वीनर अणु होता है। उन्हें प्राइमर एनील्स के विपरीत पक्ष में एकल फंसे हुए टेम्पलेट से बांधने के लिए डिज़ाइन किया गया है। टाक पोलीमरेज़ प्राइमर में न्यूक्लियोटाइड जोड़ता है और दोहरे लेबल वाले जांच की ओर नए स्ट्रैंड का विस्तार करता है। एक बार Taq पोलीमरेज़ जांच को पूरा करता है, Taq पोलीमरेज़ की एक्सोन्यूक्लिअस कार्रवाई सक्रिय हो जाती है और जांच को नीचा दिखाती है। एक बार जब यह नए स्ट्रैंड के संश्लेषण को पूरा कर लेता है, तो जांच को पूरी तरह से गिरावट और फ्लोरोफोर जारी करने के अधीन किया जाता है। फ्लोरोफोर की रिहाई प्रतिदीप्ति उत्पन्न करती है। फ्लोरोसेंट क्वेनर अणु कुशलता से उत्सर्जित प्रकाश को बुझाता है और पीसीआर उत्पाद के परिमाणीकरण के लिए आउटपुट बनाता है। पीसीआर उत्पादों की फ्लोरोफोरस और मात्रा की रिहाई आनुपातिक है। इसलिए, ताकमान विधि द्वारा मात्रा का ठहराव आसानी से किया जा सकता है।

Taqman विधि का उपयोग वास्तविक समय पीसीआर, जीन अभिव्यक्ति की मात्रा का निर्धारण, आनुवंशिक बहुरूपता का पता लगाने, गुणसूत्र डीएनए विलोपन की मात्रा का निर्धारण, जीवाणु पहचान, माइक्रोएरे विश्लेषण का सत्यापन, एसएनपी जीनोटाइपिंग आदि में किया जाता है।

ताकमान और एसवाईबीआर ग्रीन वास्तविक समय पीसीआर (मात्रात्मक पीसीआर) में नियोजित दो तरीके हैं। दोनों विधियां कुशलतापूर्वक पीसीआर उत्पाद की मात्रा का ठहराव सक्षम करती हैं और प्रतिदीप्ति के उत्सर्जन पर निर्भर करती हैं। टैक्मैन विधि संचित डीएनए का पता लगाने के लिए दोहरे लेबल वाले जांच का उपयोग करती है, जबकि SYBR ग्रीन विधि एक फ्लोरोसेंट डाई का उपयोग करती है। इन दोनों विधियों में आणविक जीव विज्ञान में भी अलग-अलग अनुप्रयोग हैं।

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छवि सौजन्य: 1. "SYBR हरे रंग के साथ पीसीआर" -Ygonaar 23:09, 7 मार्च 2006 (UTC) - यह पावर पॉइंट, CC BY-SA 3.0, https://commons.wikar.org के साथ Ygonaar द्वारा बनाया गया एक ग्राफ है। /w/index.php?curid=619528 2. "तक्मान" उपयोगकर्ता द्वारा: Braindamaged - कॉमन्स विकिमीडिया के माध्यम से स्वयं का कार्य (सार्वजनिक डोमेन)